）是皮肤深度伤口愈合的病理性结局，成纤维细胞过度增殖或细胞外基质过度堆积构成拱起状皮肤病变。现多选用手术、激光、药物打针等医治方法，但存在高复发率、明代《证治准绳疡医》记载，瘢痕又称蟹足肿、黄瓜痈，病机为瘀血阻滞。丹参能“破积累症坚，散瘿赘恶疮”，具有活血化瘀、凉血消痈的成效，以丹参酮。现代药理研讨证明，丹参具有改进微循环、抗血栓、抗凝血、调理免疫等效果，以及显着的抗炎、抗纤维化的效果，能够有用防治增生性瘢痕具有安全有用的优势，为下降毒副效果、进步患者依从性、防止口服给药的肝脏首过效应，研发防治
TSA具有显着的抗肝、肾、心肌纤维化效果，SAB能够有用按捺成纤维细胞增殖及胶原组成，在防治HS方面具有宽广的运用远景。Chen等[6]研讨发现，TSA能阻断细胞周期，诱导细胞前期凋亡，下降凋亡按捺基因（survivin）蛋白的表达，然后医治皮肤纤维化疾病。Liu等[4]发现，SAB能够减轻博莱霉素诱导的小鼠皮肤纤维化程度，其机制或许与按捺转化生长因子-β1（transforming factor-β1，TGF-β1）/SMAD、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated proteinkinase, MAPK）/细胞外调理蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）信号通路有关。Peng等[7]经过树立结肠炎小鼠模型调查到丹参茎叶总酚酸与丹参酮联用时对结肠炎具有协同医治效果，联合给药药效优于独自给药。因而，本研讨拟构建丹参酮II A -丹酚酸B共载脂质体水凝胶（Lip-），为活血化瘀中药的纳米透皮制剂供应新的研讨思路。
UltiMate 3000高效液相色谱仪体系，赛默飞世尔科技公司；LF-50型脂质体挤出仪，加拿大Avestin公司；NK200-1B型可视孔氮吹仪，杭州米欧仪器有限公司；JY 96-IIN型超声波细胞破碎机，宁波新芝生物科技股份有限公司；RE-2000A型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；SHA-B水浴恒温振荡器，上海力辰邦西仪器科技有限公司；Olympus CKX41型倒置式生物显微镜，北京中仪光科科技发展有限公司；TP-6型透皮涣散仪，天津市精拓仪器科技有限公司；FD-1-50型真空枯燥机，北京博医康实验仪器有限公司；MS-H-Pro+型磁力拌和器，美国赛洛捷克公司；3-30K型低温离心机，美国Sigma-Aldrich公司；TGL-16型台式高速冷冻离心机，湖南湘仪离心机仪器有限公司；JEM-2100F型透射电子显微镜（TEM）、JEM-1200EX型扫描电子显微镜（SEM），日本电子株式会社；Zetasizer Nano ZS90型马尔文激光粒度仪，英国Malvern Panalytical仪器有限公司；IR Prestige-21型岛津傅立叶改换红外光谱仪，日本Shimadzu岛津公司。
2.1.1TSA-SAB脂质体的制备精细称取处方量的磷脂、胆固醇、TSA（物质的量比100∶46∶3）共溶于10 mL二氯甲烷，37℃线 min，氮气吹干，加7 mL去离子水后常压孵育30 min，冰浴条件下用探头超声（100 W、超声1 s，距离1 s）5 min；将12 mg SAB溶于3 mL 1%甘氨酸-盐酸缓冲溶液，参加上述溶液中，继续孵育30 min，过0.8 μm微孔滤膜，400 nm脂质体挤出仪来回挤出20次整粒，得TSA-SAB脂质体（TSA-SAB Lips）。再参加9.0%蔗糖混合均匀，冷冻枯燥24 h，得TSA-SAB脂质体冻干粉。
CNaOH为NaOH浓度，V为NaOH的消耗量，MHA为透明质酸相对分子质量，mHA为透明质酸质量
2.2.1脂质体表征选用低速离心法测定脂质体中TSA的包封率[9]，将TSA-SAB Lips 2000 r/min（离心半径6.3 cm）离心5 min，取上清，甲醇稀释10倍并超声破乳，HPLC法测定TSA质量浓度为C 1；另取TSA-SAB Lips甲醇稀释10倍并超声破乳，HPLC法测定TSA质量浓度为C2。依据公式（2），核算得TSA的包封率为（87.93±0.97）%。
用去离子水复溶TSA-SAB Lips冻干粉，调查脂质体复溶液；将脂质体复溶液滴至铜网上，滴加2%磷钨酸溶液进行负染，天然枯燥后，运用透射电子显微镜（transmission electron microscope，TEM）调查其描摹特征；运用马尔文激光粒度仪测定其均匀粒径、粒度多涣散系数（polydispersityindex，PDI）和ζ电位。如图2所示，TSA-SAB Lips呈浅肉橘色，稀释后可调查到显着的淡蓝色乳光，TEM下呈球状或类球状层状囊泡结构；均匀粒径为（189.50±1.57）nm（n＝3），PDI为0.246±0.030（n＝3），均匀ζ电位为（−18.73±1.41）mV（n＝3）。
2.2.2傅里叶改换红外光谱（FTIR）剖析选用溴化钾压片法制备不同氧化程度的OHA、NSC和OHA/NSC样品。扫描规模为500～4000 cm−1，扫描速度为0.2 cm/s，分辨率为4 cm−1。如图3所示，与HA比较，OHA在1739 cm−1处呈现醛基弹性振荡吸收峰（-C＝O），且强度跟着氧化程度添加而增大，标明OHA制备成功。与OHA和NSC比较，OHA/ NSC在1645 cm −1处呈现亚胺键弹性振荡吸收峰（-C＝N-），且未见显着的醛基吸收峰，标明OHA的醛基与NSC的氨基之间产生席夫碱反响，OHA/ NSC制备成功。
2.2.3SEM剖析将OHA/NSC经液氮骤冷后真空冷冻枯燥，切开，对断面进行喷金处理，运用SEM调查内部微观描摹。如图4所示，OHA/NSC内部为疏松海绵状多孔资料，跟着OHA氧化程度增大，交联度变高，孔径变小，构成的网络结构细密。
2.2.4根底功能特征系列OHA/NSC pH值别离为6.28±0.04、6.59±0.12、6.89±0.23。将OHA/NSC0.4 g倒置歪斜30 s不活动，记载成胶时刻，为（77±5）s；将0.2 g冻干OHA/NSC浸没于蒸馏水中，守时取出称定质量，直至样品质量不再添加，按公式（4）核算平衡溶胀率；将2 g OHA/NSC放入温度（30.0±0.5）℃、相对湿度（50±5）%的药品安稳性实验箱中，守时取出称定质量，至质量不再削减，按公式（5）核算保湿率；将不同色彩的OHA/NSC切开，并从头拼接[11]，自愈合才能杰出；将OHA/ NSC置于不同资料（玻璃板、丁腈手套、人体皮肤）外表均能杰出黏附；将OHA/NSC经过26 G针头打针，通针性杰出，成果如表1和图5所示。
W1为冻干水凝胶质量，W2为溶胀过程中水凝胶质量，W3为初始水凝胶质量，W4为实验过程中水凝胶质量
）；将处方量扩展5倍后，测得TSA的包封率为（86.60±2.39）%（n＝3），SAB的包封率为（90.61±1.01）%（n＝3），均匀总载药量为（8.74±0.91）%（n＝3）。
调查Lip-全体形状并进行SEM剖析，成果如图6所示，Lip-呈橘红色，质地均匀，内部为三维多孔网状结构，断面可见散在脂质体球状颗粒；将Lip-置于不同资料（玻璃板、丁腈手套、人体皮肤）外表，具有杰出黏附性。
取SD大鼠进行脱毛处理，处身后剥取腹部皮肤并去除皮下脂肪等其他安排，将皮肤固定于Franz涣散池的供应室和接纳室之间，角质层朝向供应室，接纳介质溶液为无水乙醇-PEG400-生理盐水（5∶2∶3），37℃、350 r/min进行实验；将TSA和SAB溶于20 mg/mL OHA溶液中，加至150 mg/mL NSC，拌和均匀，得TSA-SAB水凝胶（TSA-SAB Gel）；别离在供应室中参加0.5 g TSA-SAB Gel、Lip-Gel@ TSA/SAB，于0、1、2、4、6、8、10、12、24、30、36、48 h别离取样5 mL，并补加等量接纳介质，氮气吹干，甲醇复溶，HPLC法测定SAB、TSA的质量浓度，按公式（6）核算单位面积累积透过量（Q n）。
Qn为n时刻点单位面积累积透过量；C n为第n个取样点所取样品中药物的质量浓度；C i为第i（i＝n－1）个时刻点所取样品中药物的质量浓度；V为接纳池体积体积（15 mL）；Vi为取样体积；A为涣散池有用触摸面积（1.766 cm2）；C0为供应室初始浓度；J为模仿方程直线部分的斜率
2.3.1皮肤刺激性取新西兰兔背部皮肤进行脱毛处理，随机分为对照组（生理盐水）、阳性对照组（15mg/mL甲醛水溶液）、free TSA-SAB组（TSA-SAB物理混合）、TSA-SAB Lips组和Lip-组，每组3只，24 h后给药，每天1次，接连7 d，记载受试部位皮肤状况；7 d后处死并取受试部位皮肤进行HE染色，显微镜下调查皮肤状况。甲醛水溶液组皮肤红肿并伴有红斑，其他给药组均未呈现反常症状。
如图8所示，甲醛水溶液组皮肤结构表皮受损，真皮安排处可见很多炎性细胞滋润，胶原纤维摆放紊乱，皮下安排轻中度水肿；对照组和free TSA/SAB组的兔子皮肤结构完好，角质层无破损，基底膜内侧细胞摆放规整严密；TSA-SABLips组和Lip-Gel@ TSA/SAB组均可见皮肤安排结构表皮细胞无序摆放，真皮安排处无炎性细胞滋润，皮下安排棘层细胞和表皮构成细胞小水肿，细胞空隙增大，提示脂质体凝胶可添加角质层细胞空隙，改动角质层结构或加强角质层水合效果然后影响角质层屏障，增强皮肤渗透性。其间，皮下安排棘层细胞和表皮构成细胞小水肿如图TSA-SAB Lips组、Lip-Gel@TSA/ SAB组所示，皮肤结构表皮受损、炎性细胞滋润如图阳性对照组所示。
2.3.2体外释药实验将Lip- 0.5 mL置于透析袋（截留相对分子质量14 000）内，参加1 mL开释介质（含1%十二烷基硫酸钠的0.9% NaCl溶液），再放入50 mL开释介质中，37℃、100 r/min水浴振摇，于0、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、30、36 h别离取样1 mL，并补加等量开释介质，HPLC法测定TSA的质量浓度。另取质量浓度持平的TSA溶液、TSA-SAB Lips和TSA-SAB Gel，同上述实验过程进行测定。
C n为第n个取样点所取样品中药物的质量浓度；V为开释介质总体积；C i为第i个时刻点所取样品中药物的浓度；V i为取样体积；W为初始参加透析袋内样品所含药物总量；Q n为n时刻点的体外释药累积开释率
2.3.3真皮停留量透皮实验完毕后，用生理盐水洗净离体皮肤，研磨成浆，甲醇溶解，超声20 min，3500 r/min（离心半径6.3 cm）离心10 min，取上清液，滤过，HPLC法测定TSA、SAB含量，核算真皮皮肤停留量。TSA-SAB/Gel中TSA和SAB的线）μg/cm2（n＝3）；Lip-中为（10.07±0.75）、（36.12±2.06）μg/cm2（n＝3）。Lip-中真皮停留量均高于TSA-SAB/Gel，标明Lip-Gel@ TSA/SAB在皮肤真皮安排积蓄，构成药物贮库，缓慢继续开释药物。3评论
TSA具有显着的抗纤维化、抗炎、促进血液循环、改进机体免疫力等效果，SAB能够按捺成纤维细胞增殖、抗内皮细胞过度分解、削减炎症反响[4]
HS方面具有宽广的运用远景。但是，TSA透皮功能较差，阻止了其在皮肤制剂领域中的运用。脂质体为双分子层结构，具有高度安排相容性和细胞亲和力，运用其结构特性一起搭载TSA、SAB 2种不同极性的药物。脂质体溶液皮肤附着功能较差，选用水凝胶支架，能够延伸给药时刻，在真皮层构成药物贮库，进步生物使费用[12]。实验经过对不同氧化程度OHA
OHA/NSC。OHA上醛基能与NSC上的氨基产生席夫碱反响构成水凝胶，当HA的氧化程度过低，醛基含量过少不利于构成均一的水凝胶；而当氧化程度过高，则醛基含量过大易导致细胞毒性过大[13]。归纳考虑均一性和细胞毒性，确认OHA50为实验条件。Dai等[14]研讨发现，TSA
SAB、丹酚酸A联合运用可按捺槟榔提取物诱导的口腔黏膜纤维化，可显着按捺小鼠口腔黏膜成纤维细胞的反常增殖和胶原堆积，按捺I型胶原（collagen type 1，COL1A1）和III型胶原（collagen type 3，COL3A1）的转录，经过添加基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP2）和MMP9的活性，下降安排金属蛋白酶按捺因子-1（tissue specific inhibitor-1，TIMP-1）和TIMP-2的表达，改进胶原生成和代谢的平衡，按捺结缔安排生长因子（connectivetissue growth factor，CTGF）、TGF-β1、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）等促炎、促纤维化因子的转录和开释，其抗纤维化效果机制或许与按捺槟榔提取物诱导的蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）/ERK和TGF-β1/Smads通路有关[15]。TSA和SAB联用或许经过调控相关MMPs和TIMPs的表达与活性，发挥抗HS效果[15-16]。本实验成果标明，Lip-质量安稳，具有杰出的缓释功能，且药物真皮停留功能杰出，有助于下降给药频率，进步患者顺应性[13]，后续实验将深入研讨Lip-
